酶標儀在實驗室中的應用越來越普及，酶標儀的檢定也就越來越重要。酶標儀的檢定內容主要包括干涉濾光片波長誤差及重復性、吸光度誤差、穩定性和重復性、儀器靈敏度、通道差異及吸光度的線性。
吸光度示值穩定性(r)的檢定：
選用492nm波長或儀器*的專一波長，將吸光度標稱值為1.0A的光譜中性濾光片，平放在微孔酶標板的空板架上，以空氣為參比，測量并記錄酶標儀的初始吸光度示值(A0)，5min、10min后分別再測一次。吸光度示值穩定性(r)計算：r等于后兩次吸光度示值的大值與A0的差。
波長示值誤差和波長重復性的檢定：
從酶標儀取出儀器所用有標稱波長(λ)的干涉濾光片(405，450，492，620nm)，使用波長示值誤差優于±0.5nm的分光光度計，將干涉濾光片用1mm左右銅或鋁金屬絲懸掛固定于分光光度計比色杯架第二孔右外側，干涉濾光片平面需與入射光束垂直。以1nm的改變幅度，從低到高，檢測各干涉濾光片在(±20)nm范圍內的透射比，繪制波長一透射比特性曲線，求出峰值波長(λi)，每片干涉濾光片重復檢測三次并求峰值波長均值。
干涉濾光片波長示值誤差(△λ)計算：△λ=峰值波長均值-λ;波長重復性(δλ)計算：δλ等于三次檢測峰值波長大值和小值之差。
吸光度示值誤差的檢定：
先將吸光度標稱值(A)分別為0.2，0.5，1.0，1.5的四塊光譜中性濾光片(分光光度計附件)，在分光光度計上依次選用405，450，492，630nm波長或酶標儀*的專一波長，以空氣為參比，檢測光譜中性濾光片的吸光度。每個濾光片每個波長檢測三次，取均值作為該片在該波長下的吸光度標準值(As)。然后，將四塊光譜中性濾光片同時平放在微孔酶標板的空板架上，以空氣為參比，酶標儀連續測量3次，依次記錄儀器吸光度示值，并計算平均值(Ax)。
吸光度示值誤差(△A)計算：△A=Ax-As，取計算后的所有△A中的誤差大值作為該酶標儀的吸光度示值誤差。
吸光度重復性的檢定：
按吸光度示值計算的方法將吸光度標稱值(A)為0.5或1.0光譜中性濾光片，以空氣為參比，于酶標儀微孔酶標板的空板架某一固定孔位重復測定6次(n)，記錄每一次吸光度(Xi)，求吸光度均值，按下式計算RSD偏差值(RSD)，以RSD表示儀器吸光度重復性。
